ELISA試劑盒的靈敏度可通過(guò)以下方法進(jìn)行提升
點(diǎn)擊次數(shù)：663 更新時(shí)間：2019-07-11
Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中，ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。
如何提升ELISA試劑盒的靈敏度：
1、包被液稀釋的抗原（4、8、16、32、64、128ng/ml），用移液器小心將抗原液100μl加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可產(chǎn)生氣泡。每個(gè)濃度加4孔（4個(gè)復(fù)孔），對(duì)照孔4孔加入相同體積的包被液；其中兩孔加入100μl樣本。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，放入4℃中包被過(guò)夜。
2、洗滌：將酶標(biāo)板孔中的包被液傾干凈，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，加入洗滌液洗滌進(jìn)行洗滌。采用浸泡式洗滌法，將洗滌液注滿板孔，放置3min，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不隨意縮短，吸干孔內(nèi)洗滌液，也可甩去洗滌液，反扣在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌4次。
3、封閉：在酶標(biāo)板孔的底部加入封閉液200μl，室溫下封閉1h。
4、1h后將酶標(biāo)板孔中的封閉液傾倒干凈，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，然后每孔中加入一抗使用液100μl，注意將抗體液加在酶標(biāo)板孔的底部，避免加在孔壁上部。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯，在37℃溫箱中放置2h。
5、2h后取出酶標(biāo)板，傾倒干凈酶標(biāo)板孔中的一抗溶液，并反扣在干凈的吸水紙上拍干。洗滌4次，洗滌方法同2。
6、在酶標(biāo)板孔中加入梅標(biāo)二抗1:4000倍稀釋的溶液100μl，加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可產(chǎn)生氣泡。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將其放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯，在37℃溫箱中放置1h。
7、取出酶標(biāo)板，傾倒干凈孔中的二抗溶液，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，按2洗滌方法洗滌4次。
8、在酶標(biāo)板每孔中加入底物A液50μl，底物B液50μl，反應(yīng)15min～20min后，在每孔中加入反應(yīng)中止液50μl，在中止反應(yīng)后15min時(shí)在酶標(biāo)儀上于450nm處測(cè)定OD值。
