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關(guān)于免疫酶ELISA試劑盒技術(shù)
免疫酶技術(shù)就是用酶(如辣 根過(guò)氧化物酶)標(biāo)記已知抗體(或抗原)，然后與組織標(biāo)本在一定條件下反應(yīng)，如果組織中含有相應(yīng)抗原(或抗體)，抗原抗體相互結(jié)合形成的復(fù)合物中所帶酶分子 遇到底物時(shí)，能催化底物水解、氧化或還原，產(chǎn)生顯色反應(yīng)，這樣就可以識(shí)別出標(biāo)本抗原(抗體)分布的位置和性質(zhì)，通過(guò)圖像分析并可達(dá)到定量的目的。
ELISA試劑盒免疫酶技術(shù)與免疫熒光技術(shù)
免 疫熒光技術(shù)雖已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)的研究與診斷，但是熒光抗體染色標(biāo)本不能長(zhǎng)期保存，對(duì)組織細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)分辨不清，免疫酶技術(shù)則能克服上述不足，標(biāo)記免疫 酶技術(shù)的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法，對(duì)石蠟切片標(biāo)本尤為適用，為免疫病理研究開(kāi)辟了一條新途徑，酶顯色產(chǎn)物具有較高的電子密度，經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理還可以進(jìn)行免疫 電鏡觀察，免疫酶組化技術(shù)分為酶標(biāo)記法與非標(biāo)記抗體技術(shù)，前者是將酶通過(guò)交聯(lián)劑結(jié)合在抗體分子上，形成酶標(biāo)記抗體。后者是將酶作為抗原與相應(yīng)的特異性抗體 連接進(jìn)行的免疫反應(yīng)，稱(chēng)為非標(biāo)記抗體酶技術(shù)。
免疫酶技術(shù)利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用，提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)敏感性的一種標(biāo)記 免疫技術(shù)。該技術(shù)所用的酶要求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專(zhuān)一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、來(lái)源豐富、價(jià)格不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定，繼續(xù)保留著它的活 性部分和催化能力。hao在受檢標(biāo)本中不存在與標(biāo)記酶相同的酶。另外它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存，價(jià)格低廉，有色產(chǎn)物易于測(cè)定，光吸收高。
ELISA試劑盒固相載體采用免疫酶技術(shù)
免 疫酶技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。可作固相載體的物質(zhì)很多，常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有 較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來(lái)的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式，在測(cè)定過(guò)程中，它作為載體和容器，不參與化學(xué) 反應(yīng)，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。
聚苯乙烯載體的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點(diǎn)是還能兼作反應(yīng)的容器，后放 入分光光度計(jì)中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器，在洗滌過(guò)程中使圓珠滾動(dòng)淋洗，效果更好。常 用的載體為微量反應(yīng)板，于ELISA測(cè)定的產(chǎn)品也稱(chēng)為ELISA板，通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成8聯(lián)或 l2聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，并可在特定的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有 多種自動(dòng)化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測(cè)，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性 能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此 每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng／ml）包被ELISA板各孔后，每孔內(nèi)加入適當(dāng) 稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后分別測(cè)每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件，使各讀數(shù)在0.8左右。計(jì)算所有讀數(shù)的平均值。 所有單個(gè)讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙烯類(lèi)似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可切割，價(jià)廉、但光潔 度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時(shí)也略高。
為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣，可用以下方法加以檢驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后，ELISA試劑盒在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定，然后比較測(cè)定結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別大，這種載體就是這一ELISA測(cè)定的合適的固相載體。
除 塑料制品外，固相酶免疫測(cè)定的載體還有兩種材料：一是微孔濾膜，如**纖維素膜、尼龍膜等，這類(lèi)測(cè)定形式將在本章“膜載體的酶免疫測(cè)定"中介紹。另一種載 體是以含鐵的磁性微粒制作的，反應(yīng)時(shí)固相微粒懸浮在溶液中，具有液相反應(yīng)的速率，反應(yīng)結(jié)束后用磁鐵吸引作為分離的手段，洗滌也十分方便，但需配備特殊的儀 器。
